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      大鼠嗅鞘細胞提取物

      • 更新時間:  2020-07-07
      • 產品型號:  
      • 簡單描述
      • 大鼠嗅鞘細胞提取物現貨供應,質量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。
      詳細介紹

      細胞培養的優點:
      1.研究的對象是活細胞
      在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
      2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
      3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
      4.研究內容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
      5.研究的范圍比較廣泛應用的學科領域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等; 適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
      6.研究的費用相對較經濟可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

      大鼠嗅鞘細胞提取物是從大鼠原代嗅鞘細胞提取的,大鼠原代嗅鞘細胞從正常大鼠腦組織制備。所有的產品在發貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
      總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

      cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證了產品的質量。

      蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備大鼠嗅鞘組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。

      潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。

      產品名稱

       大鼠嗅鞘細胞提取物

      英文名稱

      Rat Brain: Normal Olfactory Bulb Ensheathing Cells Derivatives

      貨號

      CS-X3795

       

      培養步驟:
      一.培養基及培養凍存條件準備:
      1)準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
      2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
      3)凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
      二.細胞處理:
      1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
      2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
      對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
      1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
      2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
      3.按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
      4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
      3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
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      細胞分類:

      一種:
      是凍存產品,由氮直液接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復蘇手法對于細胞狀態影響較大,一旦細胞狀態不好,很難說是細胞自身不行,還是復蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產品的質量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
      第二種:
      是我們復蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養基常溫運輸給客戶,排除復蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
      質量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內,活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。


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