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      弧菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

      • 更新時間:  2020-06-04
      • 產品型號:  50T
      • 簡單描述
      • 弧菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
      詳細介紹

      注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

      產品名稱

      弧菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

      英文名稱

      Vibrio spp.

      貨號

      CP934873

      儲存條件:

      14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
      1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
      2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
      3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
      4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
      5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      探針法:

      弧菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
      使用方法:
      一、樣品DNA的制備
      用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
      二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
      1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
      2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
      3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
      4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
      5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
      6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
      7. NC管中不加任何陽性對照。
      8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
      探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

      應用案例:
      樣品 DNA 的制備
      1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
      稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
      2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
      3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
      4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
      6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
      7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
      8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
      9.在 PCR 管中加入下列成分。
      以下是公司正在熱銷的產品:

      Nkx2.5/Cardiac-specific homeobox 1  心臟特異性同源盒轉錄因子NKX2.5抗體三糖鐵(TSI)瓊脂

      NKR/Neurokin B receptor  神經激肽B受體抗體三糖鐵(TSI)瓊脂斜面

      NKG2D/CD314/KLRK1  NK細胞受體2D抗體胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)

      NKG2C  NK細胞受體2C抗體豆粉瓊脂

      NKG2A  NK細胞受體2A抗體無菌脫纖維綿羊血

      NKB  神經激肽B抗體平板計數牛奶瓊脂培養基

      弧菌通用探針法熒光定量PCR檢測試劑盒NKA  神經激肽A抗體培養基

      NK-2R  神經激肽A受體/K物質受體抗體緩沖蛋白胨水(BPW)

      Nitrotyrosine  硝基酪氨酸抗體無菌緩沖蛋白胨水(BPW)

      NIT2  NIT2蛋白抗體化鎂孔雀綠增菌液(MM)(RVS 肉湯)

      NIT1  腈水解酶1抗體亮綠酚紅瓊脂

      NIS  鈉碘轉運體蛋白抗體亞鹽胱氨酸(SC)增菌液

      NIRF/RNF107  環指蛋白107抗體尿素瓊脂基礎(pH7.2)

      NIR2  膜脂轉移蛋白1抗體40%尿素溶液

      NIR1/RDGBA3  膜相關脂轉運蛋白抗體尿素瓊脂斜面(pH7.2)新城疫病通用型實時熒光RT-PCR檢測試盒白樺脂酸

      豬瘟病通用型RT-PCR檢測試盒白蠟樹精

      豬瘟病通用型實時熒光RT-PCR檢測試盒白蠟樹素

      豬瘟兔化弱疫苗實時熒光RT-PCR檢測試盒白藜蘆醇

      豬瘟病野株實時熒光RT-PCR檢測試盒白藜蘆醇-4'-醚

      豬瘟兔化弱疫苗與豬瘟野株雙重實時熒光RT-PCR檢測試盒白藜蘆醇三芐醚

      豬偽狂犬病PCR檢測試盒白藜蘆醇三醚

      豬偽狂犬?。╣E基因)PCR檢測試盒白麻苷

      豬偽狂犬病實時熒光PCR檢測試盒白綿馬素AA

      豬偽狂犬?。╣E基因)實時熒光PCR檢測試盒白綿馬素AP


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