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      克氏錐蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

      • 更新時間:  2020-06-03
      • 產品型號:  50T
      • 簡單描述
      • 克氏錐蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
      詳細介紹

      產品名稱

      克氏錐蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

      英文名稱

      Trypanosoma cruzi

      貨號

      CP934844

      儲存條件:

      14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
      1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
      2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
      3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
      4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
      5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      探針法:

      克氏錐蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針,它的熒光與目的序列的擴增相關。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端,而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時,熒光基團發射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進行延伸反應時,聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進行酶切,使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著擴增循環數的增加,釋放出來的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產物的數量呈正比關系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準確性。
      使用方法:
      一、樣品DNA的制備
      用自選方法提取細菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
      二、制備O157:H7標準曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
      1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
      2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
      3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
      4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
      5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
      6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
      7. NC管中不加任何陽性對照。
      8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線。
      探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖:

      應用案例:
      樣品 DNA 的制備
      1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
      稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
      2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
      3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
      4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
      6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
      7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
      8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應(20  μL 體系,在樣品制備室進行)
      9.在 PCR 管中加入下列成分。
      以下是公司正在熱銷的產品:

      PDZD6  PDZ結構域PDZK6蛋白抗體硝酸鹽肉湯

      PDZD5A/FRMPD2L2  PDZ結構域PDZK5A蛋白抗體無菌硝酸鹽肉湯

      PDZ RHOGEF/GTRAP48  Rho鳥甘酸轉運蛋白抗體硝酸鹽還原試

      PDXK  吡哆激酶抗體明膠生化管

      PDX1  胰島素促進因子抗體(胰十二指腸同源異型盒蛋白)營養瓊脂NA

      PDSS2  抑癌蛋白DLP1抗體芽孢桿菌培養基基礎

      PDPK1  3酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體阿須貝Ashby培養基

      PDLIM3/ALP  輔肌動蛋白相關LIM蛋白抗體根瘤菌培養基 YM

      PDLIM1  細胞骨架蛋白C端PDLIM1抗體根瘤菌培養基Ⅱ基礎

      克氏錐蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒Pdk4  酮酸脫酶激酶4抗體硅酸鹽細菌培養基

      PDK2  酮酸脫酶激酶亞型2抗體固氮莖瘤根瘤菌培養基

      PDIA2/PDI  蛋白質二硫鍵異構酶抗體馬培養基

      PDI/P4HB/ERBA2L/PDIA3  蛋白質二硫鍵異構酶抗體高合成一號瓊脂培養基

      PDHX  酮酸脫酶復合物X蛋白抗體聯合固氮菌培養基

      PDHB  酮酸脫酶E1β亞單位抗體馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養基不含霉素酸鈉Butyric Acid Sodium Salt室溫干燥保存1g

      基硫介質Butyl-S Medium常溫保存50mL

      基介質Buty Medium常溫保存50mL

      疊氮鈉Sodium Azide常溫保存25g

      凋亡抑制蛋白Survivin基因PCR檢測試盒低溫運輸,-20℃保存50T

      凋亡抑制蛋白Livin基因PCR檢測試盒低溫運輸,-20℃保存50T

      凋亡DNAoutApoptotic DNAOUT-20℃保存24次

      淀粉樣 β- 蛋白片段 25-35Amyloid β-Protein Fragment 25-35-20℃保存250μg

      電泳級酚藍溶液Bromophenol Blue Solution,EG常溫避光干燥保存10mL

      電泳級尿素Urea,EG常溫100g

      注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。


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